手性色譜柱的正確使用和維護(hù)非常重要。稍有不慎就會(huì)降低柱效，縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，應(yīng)注意以下問(wèn)題，以維護(hù)手性色譜柱。

1.避免壓力和溫度的急劇變化和任何機(jī)械振動(dòng)。溫度的突然變化或色譜柱從高處脫落會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀態(tài)；柱壓的突然升降也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)的填料。因此，調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)緩慢進(jìn)行，閥門(mén)進(jìn)樣時(shí)不宜過(guò)慢旋轉(zhuǎn)。

2.溶劑的組成應(yīng)逐漸改變，特別是在反相色譜中，不能直接從有機(jī)溶劑改為全水，反之亦然。

3.一般來(lái)說(shuō)，色譜柱不能反沖。只有當(dāng)生產(chǎn)者指示柱可以反沖時(shí)，才能反沖去除留在柱頭上的雜質(zhì)。否則，反沖會(huì)迅速降低柱效。

4.選擇合適的流動(dòng)相(尤其是流動(dòng)相)pH)，為了避免固定相的損壞。有時(shí)，預(yù)柱可以連接到進(jìn)樣器前面。當(dāng)分析柱與硅膠鍵合時(shí)，預(yù)柱為硅膠，使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱前提前被硅膠覆蓋“飽和”避免分析柱中的硅膠基質(zhì)溶解。

5.經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗手性色譜柱，去除柱內(nèi)保留的雜質(zhì)。清洗時(shí)，流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)逐漸用混溶溶劑過(guò)渡，每個(gè)流動(dòng)相的體積應(yīng)為柱體體積的20倍左右。

6.保存色譜柱時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿乙腈或甲醇，柱接頭應(yīng)擰緊，防止溶劑揮發(fā)和干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

7.在使用手性色譜柱的過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片堵塞，應(yīng)更換濾片或取出清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，污染柱頭；如果柱效率降低或色譜峰變形，柱頭可能塌陷，死體積增大。在后兩種情況下，小心擰開(kāi)柱接頭，用干凈的小鋼取出柱頭填料1~2mm高度(注意清除污染填料)，然后整平柱內(nèi)填料。然后用適當(dāng)?shù)娜軇駶?rùn)固定相(與柱內(nèi)相同)填充色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。后柱效率提高，但難以恢復(fù)到新柱水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前安裝與分析柱固定相同的短柱(5~30mm)，能起到保護(hù)、延長(zhǎng)柱壽命的作用。使用保護(hù)柱會(huì)失去一定的柱效，這是值得的。正確使用時(shí)，色譜柱的使用壽命一般可達(dá)2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料只能用于硅膠填料pH=在2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后，柱頂可能會(huì)保留一些吸附性強(qiáng)的物質(zhì)，特別是一些有色物質(zhì)更容易看到被吸入柱頂?shù)奶盍稀?/p>

8.新色譜柱使用一段時(shí)間后，柱頂填料可能會(huì)塌陷，降低柱效。此時(shí)，還可以添加填料來(lái)恢復(fù)柱效。每次工作結(jié)束后，最好用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如，ODS柱子應(yīng)該用甲醇沖洗到基線平衡。當(dāng)使用鹽緩沖溶液作為流動(dòng)相時(shí)，使用后應(yīng)使用無(wú)鹽流動(dòng)相進(jìn)行沖洗。含鹵素元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不應(yīng)長(zhǎng)期接觸。HPLC儀器上的柱子如不常用，應(yīng)每4~5天開(kāi)機(jī)沖洗15分鐘。