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反相色譜柱污染物清洗時有哪些清洗方法?

欄目:行業(yè)資訊 發(fā)布時間:2024-02-22
?反相色譜是目前在高效液相色譜中被廣泛應(yīng)用的技術(shù),主要原因是它適用于大多數(shù)非極性物質(zhì)以及許多可離子化和離子化合物的分析。

反相色譜是目前在高效液相色譜中被廣泛應(yīng)用的技術(shù),主要原因是它適用于大多數(shù)非極性物質(zhì)以及許多可離子化和離子化合物的分析。


如果某色譜柱出現(xiàn)污染問題,通常是因為在進(jìn)行重復(fù)進(jìn)樣時,強(qiáng)保留物質(zhì)逐漸累積導(dǎo)致的。簡單的清洗步驟通常足以清除這些污染物,以恢復(fù)其色譜性能。在進(jìn)行等度運行后,如果使用90~100%含量的溶劑B(比如甲醇、乙醚和四氫呋喃等雙溶劑反相系統(tǒng)中洗脫能力較強(qiáng)的溶劑)沖洗20個柱體積,即可清除污染物。需要注意的是,色譜柱的柱體積和空柱管體積是不同的概念,例如一根4.6x250mm的柱子的柱體積只有2.5ml,而2.1x150mm的柱子則只有0.28ml的柱體積。


若采用緩沖鹽系統(tǒng),請勿直接切換至強(qiáng)溶劑,因為突然切換至高濃度有機(jī)溶劑可能會導(dǎo)致緩沖鹽在HPLC流動體系中沉淀,進(jìn)而引起更嚴(yán)重的問題,如柱頭篩板堵塞、連接管路堵塞、泵泄漏、活塞損傷或進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)軸失靈。建議先使用無緩沖鹽流動相(即用水代替緩沖液),沖洗5 ~ 10個柱體積,然后再切換至強(qiáng)溶劑清洗。



某些情況下,即便使用強(qiáng)溶劑B,也難以清除附著在色譜柱上的污染物。此時就需要運用更為強(qiáng)力的溶劑,或采用一系列溶劑的組合。


如果污染物不是生物質(zhì)的,一種強(qiáng)效溶劑或者幾種溶劑組合的清洗方法基本可以解決問題。許多柱子生產(chǎn)廠家的官網(wǎng)和產(chǎn)品說明書上也會提供清洗方法的推薦。


所有清洗方法的步驟通常相似,使用的溶劑強(qiáng)度會逐漸增加,最后一個溶劑通常會是非極性非常強(qiáng)的,例如醋酸乙酯或者烷烴,以便溶解非極性污染物如脂質(zhì)和油類。每個溶劑在系列中都要確保與下一個溶劑互相溶解。


在完成整個清洗過程后,必須采用一種中等強(qiáng)度、互溶性非常好的溶劑來過渡回到原來的流動相體系。例如,我們可以選用異丙醇作為過渡溶劑,因為它既能與正己烷或二氯甲烷互溶,也能與水相溶劑互溶。然而,由于異丙醇的粘度很高,我們需要保持較低的流速,以避免造成泵壓過高的情況。


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